小鼠ELISA试剂盒：实验操作与数据分析指南

更新时间：2025-07-14

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　　小鼠ELISA（酶联免疫吸附测定）试剂盒是一种用于检测小鼠血清、细胞培养上清液等样本中特定蛋白质或生物分子浓度的常用工具。其操作简便、灵敏度高，广泛应用于生物医学研究和临床检测。以下是关于小鼠ELISA试剂盒的实验操作与数据分析的详细指南。

　　一、实验操作步骤

　　（一）实验准备

　　试剂盒平衡：在实验开始前30分钟，将试剂盒从冰箱中取出，恢复至室温。

　　试剂配制：

　　标准品：按照说明书要求，将冻干标准品溶解并稀释至所需浓度梯度。

　　洗涤液：通常使用蒸馏水按一定比例稀释。

　　检测抗体和酶结合物：用稀释液按指定比例稀释。

　　（二）加样与孵育

　　加样：在酶标板中加入100μL标准品或样本，标准品需做复孔。加样时避免气泡，确保样本均匀分布。

　　孵育：将酶标板置于37°C孵箱中孵育90分钟。

　　洗涤：弃去孔内液体，加入350μL洗涤液，浸泡1-2分钟，甩干，重复4次。

　　（三）检测抗体与酶结合物孵育

　　加检测抗体：加入100μL检测抗体工作液，37°C孵育60分钟。

　　洗涤：重复上述洗涤步骤。

　　加酶结合物：加入100μL酶结合物工作液，37°C孵育30分钟。

　　洗涤：重复洗涤步骤。

　　（四）显色与终止

　　显色：加入90μL显色剂，37°C避光显色15-20分钟。

　　终止：加入50μL终止液，终止反应。

　　读数：在酶标仪450nm波长下测量吸光度值（OD），5分钟内完成读数。

　　二、数据分析

　　（一）标准曲线绘制

　　计算平均OD值：计算每个标准品和样本的平均OD值，减去零孔的OD值。

　　绘制标准曲线：以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线。

　　（二）样本浓度计算

　　查找浓度：根据样本的OD值，在标准曲线上查找对应的浓度。

　　稀释倍数校正：如果样本经过稀释，计算浓度时需乘以稀释倍数。

　　（三）注意事项

　　结果异常处理：如果样本OD值高于标准曲线上限，需重新稀释样本后检测。

　　重复性检查：标准品和样本的复孔OD值应具有良好的重复性，否则需重新实验。

　　三、实验注意事项

　　试剂保存：未使用的板条应立即放回包装袋中，密封保存。

　　避免污染：使用一次性吸头，避免交叉污染。

　　操作规范：严格按照说明书操作，确保试剂充分混匀。

　　环境控制：实验应在室温（25-28℃）下进行。

　　通过以上操作步骤和数据分析方法，可以确保小鼠ELISA试剂盒的实验结果准确可靠。实验过程中严格遵守操作规范和注意事项，能够有效提高实验的成功率和重复性。

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