加标回收率低于80%怎么办

低于 80% 先暂停使用该批次数据，优先排查基质抑制、加标不当和标准品稀释不匹配**。ELISA 回收率常用可接受范围为 **80%—120%**，低于此范围说明样本成分可能压低了信号

**按这个顺序排查**

- **重算一遍**：用“测得浓度－本底浓度"除以加入浓度。本底取复孔均值，避免单孔波动影响结果。
- **检查加标操作**：加标体积尽量不超过样品体积的 1%，并充分混匀。体积过大或混合不充分都会拉低回收率[^1]。
- **检查标准品**：确认复溶、稀释和有效期。标准品降解或稀释偏差，会同时造成整板回收率偏低。
- **做基质匹配曲线**：用同批次阴性样本或试剂盒基质稀释液配制标准品。纯缓冲液曲线遇到血清、血浆或细胞上清时，容易出现系统性偏低[^7]。
- **稀释样本重新测试**：先用标准品稀释液按 1:2 稀释；仍偏低再试 1:5、1:10。稀释后需在标准曲线有效范围内，最终结果乘以稀释倍数[^9]。
- **调整样本处理**：离心去除沉淀，检查 pH 是否处于 6—8，降低去垢剂、高盐或蛋白浓度。抗原抗体反应对 pH 和缓冲环境较敏感[^26]。

**怎么判断是哪种原因**

标准曲线正常、只有加标样本偏低，重点怀疑**基质效应或加标体积问题**。标准曲线也差，则优先查**标准品、稀释梯度、温育和显色步骤**。

如果优化后仍持续低于 80%，说明该试剂盒与当前样本兼容性较差，可更换更适配的试剂盒。回收率异常反映的是系统误差，**直接用固定系数校正原始数据可靠性有限