细胞复苏和冻存

细胞复苏和冻存是细胞培养中常见的操作，主要用于保存和恢复细胞系。以下是一些基本的步骤和注意事项：
### 细胞冻存（Cryopreservation）
1. **细胞准备**：选择生长状态良好的细胞，通过胰蛋白酶或EDTA等消化细胞，使其成为单个细胞悬液。
2. **细胞计数**：使用细胞计数器确定细胞密度。
3. **加入冻存液**：将细胞悬液与冻存液按一定比例混合，常用的冻存液含有DMSO或丙三醇等作为保护剂。
4. **分配细胞**：将细胞悬液分配到冻存管中，通常每管的细胞量是1-2mL。
5. **逐步降温**：
- 短期保存：可以立即将冻存管放入-80°C冰箱或液氮罐中的冻存盒中。
- 长期保存：通常采用程序降温机进行逐步降温，以防止细胞内冰晶形成，造成损伤。
6. **储存**：将冻存管存放在液氮罐中，温度约为-196°C。
### 细胞复苏（Thawing）
1. **准备**：从液氮罐中取出所需的冻存管，快速转移至37°C水浴中。
2. **解冻**：在水浴中轻轻摇动冻存管，直到冰wan全融化。
3. **去除冻存液**：将细胞悬液转移到含有wan全培养基的离心管中，轻轻混合。
4. **离心**：通常以低速（约100-200g）离心5-10分钟，以沉淀细胞。
5. **去除上清**：小心去除上清液，避免扰动细胞沉淀。
6. **重悬和接种**：将细胞重悬于适量的wan全培养基中，转移到培养容器中进行培养。
### 注意事项
- **无菌操作**：整个过程需在无菌条件下进行，避免污染。
- **冻存液的选择**：不同细胞类型可能需要不同的冻存液配方。
- **细胞密度**：冻存时细胞密度不宜过高，以免影响复苏后的细胞活性。
- **解冻速度**：快速解冻有助于减少细胞损伤。
- **复苏后的监测**：复苏后需检查细胞生长状态和污染情况。
细胞冻存和复苏的成功与否直接关系到细胞系的质量和长期使用的可行性，因此这些操作需要严格遵循标准操作程序（SOP）。