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PCR检测试剂盒样本如何处理

更新时间:2024-07-16      浏览次数:767

PCR检测试剂盒的样本处理涉及几个关键步骤,具体取决于所使用的试剂盒类型和待检测的样本。以下是一些典型的步骤和注意事项:


样本处理(样本处理区)过程:

1、先对痰液样本进行目测,若样本中唾液占大部分,则需重新采集样本

2、目测合格后,在样本中加入2~3倍体积4%的NaOH溶液,<采希?50rpm、37℃条件下处理30min或常温下1Hr,使其充分液化(无明显固状物并且吸出时无拖丝现象即为液化*;若液化不*,可适当再加入少量4%的NaOH溶液直至液化*)。

3、取液化后的样本900ul以及试剂盒中的阴性对照、强阳性对照和临阳性对照各500ul于1.5ml无菌离心管中,13,000rpm离心10min。

4、弃上清(先倒出大部分液体,再用移液器尽量吸干至无明显液滴为止),沉淀中加入1ml灭菌生理盐水,大豆RR PCR检测试剂盒振荡悬浮(注意:按紧离心管盖后,横向按在旋涡振荡器上将沉淀振起),13,000rpm离心10min。

5、弃上清,用1ml灭菌生理盐水洗涤沉淀,13,000rpm离心10min。

6、弃上清,向沉淀中加入DNA提取液30ul,振荡混匀,2,000rpm离心5sec,放37℃温浴30min,再放入100℃水浴/干浴10min,13,000rpm离心10min,保留上清备用。(如果样本裂解产物当天不使用,请于-20℃保存。)


支原体PCR检测:这种试剂盒用于检测细胞培养物和其他生物基质中的支原体。样本预处理包括从细胞培养液中取100µl上清至1.5 ml反应管中,然后在95℃下孵育10分钟,接着以最大转速离心15秒。之后,可以直接使用2µl进行PCR,或者在特定温度下保存样本长达6天1。


血液样本的直接PCR:这种试剂盒允许直接对全血样本进行PCR扩增,无需进行DNA纯化或样本预处理。它兼容含EDTA、肝素、柠檬酸盐等常规抗凝剂的新鲜血液、冷藏(冻)血液及商用干xue渍。试剂盒中的DNA Polymerase组合具有高保真性和对PCR抑制剂的高耐受性2。


荧光定量PCR:荧光定量PCR(Real-time PCR)是一种在标准PCR技术基础上发展起来的方法,用于定量样本中的DNA或RNA。它通过在PCR扩增反应体系中加入荧光基团,实现扩增反应中每个循环产物荧光信号的实时检测,从而进行定量分析3。


RT-PCR方法检测xin冠病毒:在RT-PCR检测中,通常包括RNA提取、RT反应和PCR反应三个环节。质控品的使用对于试剂盒生产过程中的质量分析和质量控制至关重要。例如,模拟病毒质控品可用于样本采集、保存、转运和RNA提取及其后续实验操作等过程的质量控制4。


这些步骤展示了PCR检测试剂盒样本处理的多样性和复杂性。具体操作需要根据试剂盒说明书和实验要求进行。



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