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ELISA试剂盒技术

更新时间:2023-06-05      浏览次数:250

ELISA原理

ELISA利用抗原抗体之间专一性结合之特性,对标本进行检测;由于结合与固体承载物(一般为塑胶孔盘)上之抗原或抗体仍可具有免疫活性,因此设计其结合机制後,配合酵素显色反应,即可显示特定抗原或抗体是否存在,并可利用显色之深浅进行定量分析。根据待测样品与结合机制的不同,ELISA可设计出各种不同类型的检测方式,主要以"三明治法"(sandwich)"间接法"(indirect)、以及"竞争法"(Competitive)三种为主,以下 为各种方法之介绍。

ELISA分类

ELISA的双抗夹心法原理;

ELISA的双抗夹心法,又称"三明治法"

三明治法常用于检测大分子抗原,一般之操作步骤为:

将具有专一性之抗体固着(coating)于塑料孔盘上,完成後洗去多馀抗体;

加入待测标本,标本中若含有待测之抗原,则其会与塑料孔盘上的抗体进行专一性结合;

洗去多馀待测标本,加入标记有酵素之二次抗体,与抗原结合;

洗去多馀未结合的二次抗体,加入酵素受体使呈色,以肉眼或仪器读取显色结果。

三明治法分别以两种抗体对标本中的抗原进行两次专一性辨认,因此专一性相当高,但此待测抗原必须是多价抗原,如此才可获得两种以上的专一性抗体,以分别进行夹心;而且此法需要足够的表位空间以进行抗原抗体的夹心,所以并不适用于半抗原或小分子抗原等分子量较小之标的。

ELISA双抗夹心法的衍生方法如ABC法:ELISA的生物素 -亲和素系统,该产品系列是检测方法上的重要革命。生物素/亲和素系统用于ELISA一般有三种形式,即桥联法(BAB)、标记法 (BA)和ABC法,不少学者用之检测了不同的抗原—抗体系统均取得了较好的结果,其中以BA法和ABC法应用较多,敏感性一般比常规ELISA法高 480倍。

LISA的间接法:

间接法常用于检测抗体,一般之操作步骤为:

将已知之抗原固着于塑胶孔盘上,完成後洗去多馀之抗原;

加入待测标本,标本中若含有待测之一次抗体,则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性结合;

洗去多馀待测标本,加入带有酵素之二次抗体,与待测之一次抗体结合;

洗去多馀未结合的二次抗体,加入酵素受体使酵素显色,以肉眼或仪器读取显色结果。

ELISA的竞争法原理;

竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制,一般用于检测小分子抗原,其操作步骤为:

将具有专一性之抗体固着于塑胶孔盘上,完成後洗去多馀抗体;

加入待测标本,使标本中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性结合;

加入带有酵素之抗原,此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性结合,由于塑胶孔盘上固着的抗体数量有限,因此当标本中抗原的量越多,则带有酵素之抗原可结合的固着抗体就越少,亦即,两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗体结合,即所谓竞争法之由来。

洗去标本与带有酵素之抗原,加入酵素受体使酵素显色,当标本中抗原量越多,代表塑胶孔盘内留下的带有酵素的抗原越少,颜色也就越浅。

当需要检测无法获得两种以上单一性抗体的抗原,或是不易得到足够的纯化抗体以固着在塑胶孔盘上时,一般会考虑使用竞争法ELISA

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