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ELISA实验结果为什么有时候会复测?

更新时间:2023-03-15      浏览次数:248

ELISA实验过程中时常会出现复测现象即我们时常说的"花板"现象,这种现象影响检验结果的正确判读,对工作造成一定的不利影响,一旦出现“花板",实验结果必须放弃,重新进行,不仅浪费物料和时间,而且还会出现样本量缺少、交叉污染、报告延迟等一系列问题。

 

影响因素分析如下:

 

一、标本因素

 

正确处理标本,防止大规模溶血、血浆层异物、使用一次性加样枪头,防止交叉污染。血清和血浆均可以用于检测,但血清的分离应在抽血后等血液wan全凝固后再离心。

 

二、试剂因素

 

正确保存及使用有效试剂。使用过期试剂及底物接触金属容器、底物混合后放置时间较长均影响实验结果的准确性。选择试剂时应选择灵敏度高、特异性好、稳定性好,批间差小的试剂。不同厂家的试剂不能混用,包括底物和洗涤液。检测前应将试剂放置室温平衡半小时,洗涤液应现用现配,同时观察浓缩洗涤液中有无结晶,若有结晶应放37℃水浴中融化后才可使用。

 

三、技术人员操作因素

 

严格按照相关实验SOP操作实验。加样时应尽可能的垂直加样,并加在包被孔的底部(注:勿应用力过度破坏底部包被物质),不可加在孔的上部及外部。

 

四、温浴的因素

 

使用水浴箱作为温浴设备时,应注意水的深浅对结果的影响,当水浴箱中水的的实测温度37℃时,则水面温度可能只有34℃,空气温度更低,甚至只有二十多度,所以当水浴箱中水位过低时则酶标微孔板没有浸入水中,则反应温度会达不到37℃,相应的就会影响酶促反应。为防止边缘效应,酶标板应尽量浸入水中,以保证受热的均匀。水浴时,酶标板应封好,以免水滴滴入包被孔中,或阳性标本的蒸发。严格掌握温浴时间,不可为了早点出结果擅自缩短温浴时间。

 

五、洗板机的因素

 

废液瓶装满后应及时清空,以防止废液回流对管道的污染,而使洗涤不che底,造成“花板"。洗板结束后应用蒸馏水che底清洗管道,以防止废液在管道中的残留。同时应根据仪器维护保养程序,定期对洗板机进行维护保养。

 

六、酶标仪

 

酶标仪应安置在避光条件下,比色前应提前15-30分钟开机预热,这样测定结果会更稳定。为防止显色的加深或减弱,显色时间完成后应立即滴加终止液(避免气泡产生),并在10分钟内完成比色。酶标板从水浴箱取出后应擦净孔底水滴,若有水滴或纸屑残留在孔底,会造成酶标仪读数错误,误判定为“花板"。



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